文章标题：棉蚜AgosOBP5基因克隆、表达纯化及 结合特性研究

文章作者：王铁矿1** 李峰奇2 刘思雨1 李增凤3 李秋荣1***
关 键 词：棉蚜；气味结合蛋白；基因克隆；表达纯化；荧光竞争结合
文章摘要：

 【目的】 棉蚜Aphis gossypii是枸杞Lycium chinense、棉花Gossypium herbaceum等作物上的一种成灾性害虫。明确气味结合蛋白与气味分子的结合特征及其在棉蚜嗅觉识别过程中发挥的作用，可为今后利用化学挥发物制作诱芯防治棉蚜提供理论依据。【方法】 基于转录组数据对棉蚜气味结合蛋白（OBPs）AgosOBP5基因进行全长克隆并开展生物信息学分析；构建原核表达载体并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测；利用荧光竞争结合实验研究AgosOBP5重组蛋白与水杨酸甲酯、苯乙醇、苄醇、壬醛、1-辛烯-3-醇、棕榈酸这6种植物源气味分子的结合特征。【结果】 棉蚜AgosOBP5基因全长为675 bp，编码224个氨基酸，含有12个保守半胱氨酸，预测理论相对分子量为54.50 kD。序列比对和系统进化树分析表明，棉蚜AgosOBP5氨基酸序列与大豆蚜Aphis glycines AglyOBP5同源性最高。经异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG）诱导和SDS-PAGE检测，证明了AgosOBP5重组蛋白是可溶性蛋白，能够在上清液中表达。6种气味分子均可将AgosOBP5与N-苯基-1-萘胺（1-NPN）荧光探针体系的荧光强度值降到50%以下，不同的是水杨酸甲酯、2-苯乙醇、苄醇、壬醛、1-辛烯-3-醇这5种化合物从初始滴加，荧光值即开始下降，随后一直保持不断下降的趋势，而棕榈酸在浓度低于96 μmol·L^-1时荧光值呈升高趋势，随自身浓度不断升高后转为下降趋势。【结论】 本研究明确了棉蚜AgosOBP5基因的核苷酸及其编码氨基酸序列，根据AgosOBP5与植物源挥发物水杨酸甲酯、2-苯乙醇、苄醇、壬醛、1-辛烯-3-醇的良好结合能力，推断AgosOBP5蛋白可能在棉蚜的嗅觉信息识别中起着重要的作用。