文章标题：油茶地蜂中四个寡糖代谢相关基因克隆及其在大肠杆菌体内表达

文章作者：徐天羽1, 2** 李 震3** 曾志将1, 2***
关 键 词：油茶地蜂；油茶；蜜蜂；寡糖代谢；基因克隆；蛋白表达
文章摘要：

【目的】 油茶授粉效率很低，存在“百花一果”现象，严重影响油茶产业发展。人工饲养的东方蜜蜂Apis cerana和西方蜜蜂Apis mellifera虽具广泛授粉适应性，却受油茶花中寡糖影响，出现中毒症状。野生油茶地蜂Andrena camellia能为油茶有效授粉，可以依靠自身肠道分泌的4种关键酶消化油茶蜜、粉中的寡糖，但数量有限。为了解决油茶授粉难题，我们克隆了油茶地蜂体内4种寡糖代谢酶。【方法】通过基因组测序成功获得了α-半乳糖苷酶（α-Galactosidase, α-GAL）、半乳糖激酶（Galactokinase, GALK）、半乳糖-1-磷酸尿苷转移酶（Galactose-1-phosphate uridyltransferase, GALT）和尿苷二磷酸半乳糖-4′-变位酶（Uridine diphosphate galactose-4′-epimerase, GALE） 4个与寡糖代谢相关的关键基因编码区序列，并构建了重组表达质粒pET28a-α-GAL、pET28a-GALK、pET28a-GALT、pET28a-GALE及大肠杆菌Escherichia coli表达工程菌株pET28a-GAL-E. coli BL21、pET28a-GALK-E. coli BL21、pET28a-GALT-E. coli BL21和pET28a-GALE-E. coli BL21。【结果】 对α-GAL、GALK、GALT和 GALE进行了诱导表达和Ni2+-NTA 柱亲和层析纯化，获得纯化后的α-GAL、GALK、GALT和 GALE的蛋白分子量分别约53、55、48和39 kD，浓度分别为0.8、1.5、0.9和1.0 mg/mL。【结论】 本研究成功克隆油茶地蜂寡糖代谢相关基因并获得重组表达蛋白，研究结果为破解蜜蜂访问油茶后中毒的“瓶颈”提供了新思路和方法，为科学利用蜜蜂为油茶授粉提供了技术支撑。